优发娱乐

优发娱乐 | News
当前位置:首页 > 优发娱乐 凝胶色谱柱的使用方法
凝胶色谱柱的使用方法
点击次数:900 发布时间:2017/7/7
   凝胶色谱柱的填料是亲水而刚性,多孔球型,化学和机械性能都非常优异的聚合物。适用于以凝胶色谱的模式分析分离蛋白质、多肽、多糖、寡糖、DNA、RNA、水溶性的有机聚合物和其他水溶性大分子样品等。TSK-GEL PW系列色谱柱的pH适用范围为2~12。可使用含有50%的混合有机溶剂为流动相,使用温度可达80℃(TSK-gel G-DNA-PW 为50℃)。尽管大多数的TSK-GEL PW填料呈微弱的负电性(约5~8μeq/ml),但是对于分析分离非离子、阴离子和大多数的阳离子型样品没有任何影响。因为TSK-GEL PW填料具有非常宽的分离范围,更加线性的校正曲线以及比TSK-GEL SW色谱柱更加低得多的吸附特性,所以TSK-GEL PW色谱柱经常用于分离水溶性的合成聚合物。
  凝胶色谱柱的使用方法:
  1、 溶胀
  商品凝胶是干燥的颗粒,通常以40~63um的使用最多。凝胶使用前需要在洗脱液中充分溶涨一至数天,如在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温到近沸,则溶涨时间可以缩短到1~2小时。凝胶的溶涨一定要完全,否则会导致色谱柱的不均匀。热溶涨法还可以杀死凝胶中产生的细菌、脱掉凝胶中的气泡。
  2、 装柱
  由于凝胶的分离是靠筛分作用,所以凝胶的填充要求很高,必须要使整个填充柱非常均匀,否则必须重填。凝胶在装柱前,可用水浮选法去除凝胶中的单体、粉末及杂质,并可用真空泵抽气排出凝胶中的气泡。最好购买商品中的玻璃或有机玻璃的凝胶空柱,在柱的两端皆有平整的筛网或筛板。将柱垂直固定,加入少量流动相以排除柱中底端的气泡,在加入一些流动相于柱中约1/4的高度。柱顶部连接一个漏斗,颈直径约为柱颈的一半,然后在搅拌下、缓慢的、均匀地、连续地加入已经脱气的凝胶悬浮液,同时打开色谱柱的毛细管出口,维持适当的流速,凝胶颗粒将逐层水平式上升,在柱中均匀地沉积,直到所需高度位置。最后拆除漏斗,用较小的滤纸片轻轻盖住凝胶床的表面,再用大量洗脱剂将凝胶床洗涤一段时间。
  3、 柱均匀性检查
  凝胶色谱柱的分离效果主要决定于色谱柱装填得是否均匀,在对样品进行分离之前,对色谱柱必须进行是否均匀的检查。由于凝胶在色谱柱中是半透明的,检查方法可在柱旁放一至于柱平行的日光灯,用肉眼观察柱内是否有”纹路”或气泡。也可向色谱柱内加入有色大分子等,加入物质的分子量应在凝胶柱的分离范围,如果观察到柱内谱带窄、均匀、平整,即说明色谱柱性能良好;如果色带出现不规则、杂乱、很宽时必须重新装填凝胶柱。
  4、 上样
  凝胶柱装好后,一定要对柱用流动相进行很好的平衡处理,才能上样。凝胶柱的上样也是一个非常重要的因素,总的原则是要使样品柱塞尽量的窄和平整。为了防止样品中的一些沉淀物污染色谱柱,一般在上柱前将样品过滤或离心。样品溶液的浓度应该尽可能的大一些,但如果样品的溶解度与温度有关时,必须将样品适当稀释,并使样品温度与色谱柱的温度一致。当一切都准备好后,这时可打开色谱柱的活塞,让流动相与凝胶床刚好平行,关闭出口。用滴管吸取样品溶液沿柱壁轻轻地加入到色谱柱中,打开流出口,使样品液渗入凝胶床内。当样品液面恰与凝胶床表面平时,再次加入少量的洗脱剂冲洗管壁。重复上述操作及此,每一次的关键是既要使样品恰好全部渗入凝胶床,又不致使凝胶床面干燥而发生裂缝。随后可慢慢地逐步加大洗脱剂的量进行洗脱。整个过程一定要仔细,避免破坏凝胶柱的床层。
  5、 冲洗
  凝胶色谱柱的流动相一半多采用水或缓冲溶液,少数采用水与一些极性有机溶剂的混合溶液,除此之外,还有个别比较特殊的流动相系统,这要根据溶液分子的性质来决定。加完样品后,可将色谱床与洗脱液贮瓶及收集器相连,设置好一个适宜的流速,就可以定量地分布收集洗脱液。然后根据溶质分子的性质选择光学、化学或生物学的方法进行定性和定量测定。
  6、 再生
  因为在凝胶色谱柱中凝胶与溶质分子之间原则上不会发生任何作用,因此在一次分离后用流动相稍加平衡就可以进行下一次的色谱操作。但在实际应用中常有一定的污染物污染凝胶。对已沉积于凝胶床表面的不溶物可把表层凝胶曲调,在适当增补一些新的溶涨胶,并进行重新平衡处理;如果整个柱有微量污染,可用0.5molNaCl溶液洗脱。在通常情况下,一根凝胶柱可使用半年之久。
  凝胶柱若经多次使用后,其色泽改变,流速降低,表面有污渍等就要对凝胶进行再生处理。凝胶的再生是指用恰当的方法除去凝胶中的污染物,使其恢复其原来的性质。交联葡萄糖凝胶厂用温热的0.5mol/L氢氧化钠和0.5mol/L的氯化钠和混合液浸泡,用水冲洗到中性;而对于聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶由于遇酸碱不稳定,则常用盐溶液浸泡,然后用水冲到中性。
  7、 保存
  经常使用的凝胶以湿态保存为主,为了避免凝胶床染菌,可加少许氯仿、苯酚或硝基苯等化学物质,它可以使色谱柱放置几个月至一年。凝胶的干燥应先对凝胶进行浮选,除去细小的颗粒,并用大量水洗,除去盐和污染物,然后逐步增加一春浓度使凝胶收缩,在60~80度干燥,在整个操作过程中的蒸馏水、器皿和房间必须干净。琼脂糖凝胶的干燥操作比较麻烦,并且干燥后还不容易溶张,所以一般仍以湿态保存为主。
  这是一种基材为亲水性乙烯基聚合物的极性有机溶剂用SEC柱。填料的机械强度强,对于大多数极性溶剂来说,填料的溶胀收缩能被有效抑制,是一种可以用于多种用途的凝胶色谱柱
021-62176111
点击这里给我发消息
 

中国化工仪器网

推荐收藏该企业网站
优发娱乐梦之城娱乐诚博国际武松娱乐
优发娱乐齐乐娱乐优发娱乐梦之城娱乐
优发娱乐梦之城娱乐诚博国际梦之城娱乐
优发娱乐优发娱乐客户端优发娱乐官网电脑版武松娱乐
优发娱乐齐乐娱乐优发娱乐梦之城娱乐
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站